2 × mélange PCR Taq Plus

ADN polymérase Taq ultra-pure, haute efficacité et haute fidélité.

L'ADN polymérase Taq Plus est un mélange d'ADN polymérase Taq et Pfu. Il a une activité d'exonucléase 5'-3' et une activité d'exonucléase 3'-5', avec les caractéristiques d'une efficacité d'amplification élevée et d'un faible taux de mésappariement. Par rapport à l'ADN polymérase Taq, l'ADN polymérase Taq Plus présente les avantages d'une longueur d'amplification accrue (les modèles simples peuvent être amplifiés efficacement jusqu'à 20 kb et les modèles complexes peuvent atteindre 10 kb), une bonne fidélité, etc. Par rapport à l'ADN polymérase Pfu, il présente les avantages d'une vitesse d'amplification rapide et d'une efficacité de réaction élevée.

Chat. Non Taille d'emballage
4992791 1 ml
4992792 5*1 ml
4992793 5×1 ml

Les détails du produit

Exemple expérimental

FAQ

Étiquettes de produit

Définition de l'activité

1 unité (U) L'activité ADN polymérase Taq Plus est définie comme la quantité d'enzyme nécessaire pour incorporer 10 nmoles de désoxynucléotides dans des substances insolubles dans l'acide à 74 °C en 30 minutes en utilisant l'ADN de sperme de saumon activé comme matrice/amorce.

Contrôle de qualité

La pureté par détection SDS-PAGE est supérieure à 99% ; Aucune activité de nucléase exogène n'est détectée ; Un gène à copie unique dans le génome humain pourrait être amplifié efficacement ; Aucun changement d'activité significatif lorsqu'il est conservé à température ambiante pendant une semaine.

Paramètres techniques principaux

L'ADN polymérase Taq Plus a une activité exonucléase 5'-3' et une activité exonucléase 3'-5'. Les produits de PCR peuvent être directement clonés dans le vecteur TA. Si l'efficacité du clonage doit être améliorée, il est recommandé de d'abord purifier les produits de PCR et d'effectuer une queue A avant le clonage dans le vecteur TA.

Mélange PCR Taq Plus à un tube (Certification nationale des produits de haute technologie)

■ Le Taq Plus PCR Mix a une spécificité et une sensibilité améliorées de la réaction PCR et peut amplifier des matrices complexes avec une teneur élevée en GC, une structure secondaire, etc. Aussi peu que 2 copies du modèle cible peuvent être amplifiées, garantissant des résultats expérimentaux plus précis.

■ La formule unique de Taq Plus PCR Mix rend l'ensemble du système de réaction très stable et l'activité ne sera pas affectée par des gels-dégels répétés ou un stockage à long terme à 4°C.

■ La solution de mélange PCR pré-préparée stable et efficace peut rendre l'opération rapide et simple, réduisant considérablement l'intensité du travail et l'erreur d'échantillonnage. Un activateur et un optimiseur de PCR hautes performances sont également inclus dans le mélange, ce qui réduit les exigences relatives aux conditions de PCR.

■ Ce produit possède à la fois des systèmes contenant et sans colorant. Les produits PCR Mix contenant des colorants peuvent être directement soumis à une électrophorèse après PCR, sans ajouter de tampon d'échantillon.

Applications

Il est couramment utilisé pour l'amplification de modèles avec une haute fidélité et une structure complexe, comme une teneur élevée en GC et une structure secondaire. Dans la plupart des cas, il peut remplacer l'ADN polymérase Taq.

Tous les produits peuvent être personnalisés pour ODM/OEM. Pour plus de détails,s'il vous plaît cliquez sur Service personnalisé (ODM/OEM)


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    Experimental Example Experimental Example Utilisez l'ADN génomique comme matrice pour amplifier un fragment de 1 kb.
    Après la réaction PCR, prendre 5 ul pour la détection par électrophorèse.
    Q : Pas de bandes d'amplification

    Modèle A-1

    ■ La matrice contient des impuretés protéiques ou des inhibiteurs de Taq, etc. ——Purifiez la matrice d'ADN, éliminez les impuretés protéiques ou extrayez l'ADN matrice avec des kits de purification.

    ■ La dénaturation de la matrice n'est pas complète ——Augmentez de manière appropriée la température de dénaturation et prolongez le temps de dénaturation.

    ■ Dégradation du modèle ——Repréparez le modèle.

    A-2 Apprêt

    ■ Mauvaise qualité des amorces —— Re-synthétiser l'amorce.

    ■ Dégradation des amorces ——Aliquoter les amorces à haute concentration dans un petit volume pour la conservation. Éviter les congélations et décongélations multiples ou la cryoconservation à 4°C à long terme.

    ■ Conception incorrecte des amorces (par exemple, longueur d'amorce insuffisante, dimère formé entre les amorces, etc.) -Reconception des amorces (éviter la formation de dimère d'amorce et de structure secondaire)

    A-3 mg2+concentration

    ■ mg2+ la concentration est trop faible ——Augmentez correctement Mg2+ concentration : Optimiser le Mg2+ concentration par une série de réactions de 1 mM à 3 mM avec un intervalle de 0,5 mM pour déterminer le Mg optimal2+ concentration pour chaque matrice et amorce.

    A-4 Température de recuit

    ■ La température de recuit élevée affecte la liaison de l'amorce et de la matrice. ——Réduire la température de recuit et optimiser la condition avec un gradient de 2°C.

    A-5 Temps de prolongation

    ■ Durée d'extension courte——Augmente la durée d'extension.

    Q : Faux positif

    Phénomènes : Les échantillons négatifs montrent également les bandes de séquence cible.

    A-1 Contamination de la PCR

    ■ Contamination croisée de la séquence cible ou des produits d'amplification —— Veillez à ne pas pipeter l'échantillon contenant la séquence cible dans l'échantillon négatif ou à ne pas les renverser hors du tube de centrifugation. Les réactifs ou l'équipement doivent être autoclavés pour éliminer les acides nucléiques existants, et l'existence d'une contamination doit être déterminée par des expériences de contrôle négatif.

    ■ Contamination des réactifs ——Aliquoter les réactifs et conserver à basse température.

    A-2 Premierr

    ■ mg2+ la concentration est trop faible ——Augmentez correctement Mg2+ concentration : Optimiser le Mg2+ concentration par une série de réactions de 1 mM à 3 mM avec un intervalle de 0,5 mM pour déterminer le Mg optimal2+ concentration pour chaque matrice et amorce.

    ■ Conception d'amorce incorrecte et la séquence cible présente une homologie avec la séquence non cible. —— Re-conception des amorces.

    Q : Amplification non spécifique

    Phénomènes : Les bandes d'amplification PCR ne correspondent pas à la taille attendue, qu'elles soient grandes ou petites, ou parfois des bandes d'amplification spécifiques et des bandes d'amplification non spécifiques se produisent.

    A-1 Apprêt

    ■ Mauvaise spécificité d'amorce

    ——Amorce de refonte.

    ■ La concentration d'amorce est trop élevée ——Augmentez correctement la température de dénaturation et prolongez le temps de dénaturation.

    A-2 mg2+ concentration

    ■ Le magnésium2+ la concentration est trop élevée ——Réduire correctement la concentration de Mg2+ : Optimiser la concentration de Mg2+ concentration par une série de réactions de 1 mM à 3 mM avec un intervalle de 0,5 mM pour déterminer le Mg optimal2+ concentration pour chaque matrice et amorce.

    A-3 Polymérase thermostable

    ■ Quantité d'enzyme excessive ——Réduire la quantité d'enzyme de manière appropriée à des intervalles de 0,5 U.

    A-4 Température de recuit

    ■ La température de recuit est trop basse ——Augmentez la température de recuit de manière appropriée ou adoptez la méthode de recuit en deux étapes

    Cycles de PCR A-5

    ■ Trop de cycles PCR ——Réduisez le nombre de cycles PCR.

    Q : Bandes inégales ou frottis

    A-1 Apprêt——Mauvaise spécificité ——Re-concevoir l'amorce, changer la position et la longueur de l'amorce pour améliorer sa spécificité; ou effectuer une PCR nichée.

    A-2 ADN modèle

    ——La matrice n'est pas pure ——Purifiez la matrice ou extrayez l'ADN avec des kits de purification.

    A-3 mg2+ concentration

    ——Mg2+ la concentration est trop élevée ——Réduire correctement le Mg2+ concentration : Optimiser le Mg2+ concentration par une série de réactions de 1 mM à 3 mM avec un intervalle de 0,5 mM pour déterminer le Mg optimal2+ concentration pour chaque matrice et amorce.

    A-4 dNTP

    ——La concentration de dNTP est trop élevée ——Réduire la concentration de dNTP de manière appropriée

    A-5 Température de recuit

    ——Température de recuit trop basse ——Augmenter la température de recuit de manière appropriée

    A-6 Cycles

    ——Trop de cycles ——Optimiser le nombre de cycles

    Q : Quelle quantité d'ADN matrice doit être ajoutée dans un système de réaction PCR de 50 ul ?
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    Q : Comment amplifier de longs fragments ?

    La première étape consiste à choisir la polymérase appropriée. La polymérase Taq régulière ne peut pas relire en raison du manque d'activité de l'exonucléase 3'-5', et le mésappariement réduira considérablement l'efficacité d'extension des fragments. Par conséquent, la polymérase Taq normale ne peut pas amplifier efficacement les fragments cibles de plus de 5 kb. La polymérase Taq avec une modification spéciale ou une autre polymérase haute fidélité doit être sélectionnée pour améliorer l'efficacité d'extension et répondre aux besoins d'amplification de fragments longs. De plus, l'amplification de longs fragments nécessite également un ajustement correspondant de la conception de l'amorce, du temps de dénaturation, du temps d'extension, du pH du tampon, etc. Habituellement, les amorces avec 18-24 pb peuvent conduire à un meilleur rendement. Afin d'éviter d'endommager la matrice, le temps de dénaturation à 94°C doit être réduit à 30 secondes ou moins par cycle, et le temps d'élévation de la température à 94°C avant l'amplification doit être inférieur à 1 min. De plus, le réglage de la température d'extension à environ 68°C et la conception du temps d'extension en fonction de la vitesse de 1 kb/min peuvent garantir une amplification efficace de longs fragments.

    Q : Comment améliorer la fidélité d'amplification de la PCR ?

    Le taux d'erreur de l'amplification PCR peut être réduit en utilisant diverses ADN polymérases avec une haute fidélité. Parmi toutes les ADN polymérases Taq trouvées jusqu'à présent, l'enzyme Pfu a le taux d'erreur le plus bas et la fidélité la plus élevée (voir tableau ci-joint). En plus de la sélection d'enzymes, les chercheurs peuvent réduire davantage le taux de mutation PCR en optimisant les conditions de réaction, notamment en optimisant la composition du tampon, la concentration de polymérase thermostable et en optimisant le nombre de cycles de PCR.

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