Kit de cellules/bactéries pures RNAprep
Caractéristiques
■ Des tampons et des protocoles optimisés pour les cellules cultivées et les échantillons de bactéries rendent le processus simple et pratique.
■ La DNase I unique minimise la contamination de l'ADN génomique.
■ Les colonnes de filtration uniques sans RNase CS éliminent les autres contaminations.
■ L'ARN de haute pureté et prêt à l'emploi convient aux applications sensibles en aval.
■ Aucune extraction au phénol/chloroforme, aucune précipitation de LiCl et d'éthanol, aucune centrifugation à gradient de CsCl ne sont nécessaires, ce qui rend le processus sûr et fiable.
Applications
■ RT-PCR.
■ Northern Blot, Dot Blot.
■ PCR en temps réel.
■ Analyse des puces.
■ Criblage PolyA, traduction in vitro, analyse de protection RNase et clonage moléculaire.
Tous les produits peuvent être personnalisés pour ODM/OEM. Pour plus de détails,s'il vous plaît cliquez sur Service personnalisé (ODM/OEM)
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Matériel: Cellules Jurkat humaines (1 × 106 ) Méthode : L'ARN total des cellules Jukat humaines a été isolé à l'aide du kit RNAprep Pure Cell/Bacteria. Résultats : Veuillez voir l'image d'électrophorèse sur gel d'agarose ci-dessus. 2 à 4 ul d'éluats de 50 ul ont été chargés par piste. L'électrophorèse a été réalisée à 6 V/cm pendant 30 min sur gel d'agarose 1%. |
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Matériel : TOP10 E.coli (1×108) Méthode : L'ARN total de TOP10 E.coli a été isolé à l'aide du kit RNAprep Pure Cell/Bacteria. Résultats : Veuillez voir l'image d'électrophorèse sur gel d'agarose ci-dessus. 2 à 4 ul d'éluats de 50 ul ont été chargés par piste. L'électrophorèse a été réalisée à 6 V/cm pendant 30 min sur gel d'agarose 1%. |
A-1 Lyse ou homogénéisation cellulaire insuffisante
---- Réduisez l'utilisation de l'échantillon, augmentez la quantité de tampon de lyse, augmentez l'homogénéisation et le temps de lyse.
A-2 La quantité d'échantillon est trop grande
---- Réduisez la quantité d'échantillon utilisée ou augmentez la quantité de tampon de lyse.
A-1 Lyse cellulaire ou homogénéisation insuffisante
---- Réduisez l'utilisation de l'échantillon, augmentez la quantité de tampon de lyse, augmentez l'homogénéisation et le temps de lyse.
A-2 La quantité d'échantillon est trop grande
----Veuillez vous référer à la capacité de traitement maximale.
L'ARN A-3 n'est pas complètement élué de la colonne
---- Après avoir ajouté de l'eau sans RNase, laissez-la pendant quelques minutes avant de centrifuger.
A-4 Ethanol dans l'éluant
---- Après rinçage, centrifuger à nouveau et éliminer le plus possible le tampon de lavage.
A-5 Le milieu de culture cellulaire n'est pas complètement éliminé
---- Lors de la collecte des cellules, veuillez vous assurer de retirer le milieu de culture autant que possible.
A-6 Les cellules stockées dans RNAstore ne sont pas centrifugées efficacement
----La densité de RNAstore est supérieure au milieu de culture cellulaire moyen; donc la force centrifuge doit être augmentée. Il est suggéré de centrifuger à 3000x g.
A-7 Faible teneur en ARN et abondance dans l'échantillon
---- Utilisez un échantillon positif pour déterminer si le faible rendement est causé par l'échantillon.
A-1 Le matériau n'est pas frais
---- Les tissus frais doivent être stockés dans de l'azote liquide immédiatement ou immédiatement placés dans le réactif RNAstore pour assurer l'effet d'extraction.
A-2 La quantité d'échantillon est trop grande
---- Réduire la quantité d'échantillon.
A-3 Contamination par la RNasen
----Bien que le tampon fourni dans le kit ne contienne pas de RNase, il est facile de contaminer la RNase pendant le processus d'extraction et doit être manipulé avec précaution.
A-4 Pollution par électrophorèse
---- Remplacez le tampon d'électrophorèse et assurez-vous que les consommables et le tampon de chargement sont exempts de contamination par la RNase.
A-5 Trop de charge pour l'électrophorèse
---- Réduisez la quantité de chargement d'échantillon, le chargement de chaque puits ne doit pas dépasser 2 g.
A-1 La quantité d'échantillon est trop grande
---- Réduire la quantité d'échantillon.
A-2 Certains échantillons ont une teneur élevée en ADN et peuvent être traités avec de la DNase.
---- Effectuez un traitement à la DNase sans RNase sur la solution d'ARN obtenue, et l'ARN peut être directement utilisé pour des expériences ultérieures après le traitement, ou peut être purifié davantage par des kits de purification d'ARN.
Pour les verreries, cuites à 150°C pendant 4 h. Pour les récipients en plastique, immergé dans 0,5 M NaOH pendant 10 min, puis soigneusement rincé avec de l'eau sans RNase, puis stérilisé pour éliminer complètement la RNase. Les réactifs ou solutions utilisés dans l'expérience, en particulier l'eau, doivent être exempts de RNase. Utilisez de l'eau sans RNase pour toutes les préparations de réactifs (ajoutez de l'eau dans une bouteille en verre propre, ajoutez du DEPC à une concentration finale de 0,1% (V/V), agitez pendant la nuit et autoclave).
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